Terapia Génica para Neumonía

Tema: Micro-ARN en la regeneración de pulmones: un análisis de biología de sistemas integradores de la neumonía por influenza murina. 
La medicina regenerativa como una nueva estrategia de manejo de la influenza
Tipo de terapia génica: in vivo, con kit de extracción de miARN miRNeasy (Qiagen) en ratones BALB / c de 6-8 semanas.
Dirigido hacia: ADN, genes que codifican para: antígeno nuclear celular proliferante (PCNA) y proteína C surfactante (SP-C),  miRNAs asociados a células madre (MiR-290).       Dirigido por: miARN y microarrays de genes.                                                            
Órgano a tratar: Lóbulos pulmonares
Vía de administración: intratraqueal.
Resultados:
-Los miRNA desempeñan papeles cruciales durante la reparación de los pulmones después de una lesión.
-Controlar la expresión de los activadores e inhibidores de la proliferación pueden conducir a un estado similar al desarrollo en contraste con la progresión del cáncer
-Comprensión básica de la reparación tisular de los pulmones dañados.
-Reparación y reconstrucción de la arquitectura pulmonar después de la infección.

https://bmcgenomics.biomedcentral.com/articles/10.1186/1471-2164-15-587

Terapia con Stem Cells en Neumonía 

Tema: Efectos antiinflamatorios y antifibróticos del trasplante de células madre derivado de tejido adiposo por vía intravenosa en un modelo de ratón de neumonía intersticial inducida por bleomicina.

Tipo de stem cells:  células madre derivadas de tejido adiposo (AdSC) en ratones hembra C57BL / 6 J de 13-14 semanas de edad.

Métodos:

-Cosecha de tejido adiposo, aislamiento de AdSC y cultivo AdSC

-Evaluación del reclutamiento de mAdSC en pulmón 

-Procedimiento Quirúrgico y Estudio de Transfusión AdSC

-Análisis histológico y evaluación del área fibrótica

-Inmunocitoquímica fluorescente

-Ensayo de función celular

-RT-PCR cuantitativa en tiempo real

-Análisis estadístico

Resultado:

-Reclutamiento de mAdSCs para pulmón

-mAdSCs reduce la inflamación pulmonar

-mAdSCs reducen la fibrosis pulmonar

-La inyección intravenosa de mAdSC mejora el pronóstico en ratones BLM-IP

-Efectos de mAdSC en macrófagos murinos activados

-Efectos de mAdSC en células T CD4 + murinas

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5668313/#!po=2.08333

ADN Recombinante Artificial

Tema: Clonación, purificación, cristalización y estudios de rayos X de SPD0280 (regulador transcripcional de Streptococcus neumoniae D39) 
Objetivo: Detectar al Streptococcus neumoniae SPD0280, determinar su estructura y definir su relación con la virulencia de S. neumoniae
Gen: Secuencia para Streptococcus neumoniae SPD0280 (5–495 aminoácidos)
Enzimas de restricción: BamHI y  XhoI.
Enzimas de ligación: Ligasa T4
Vector: Plásmido bacteriano (pET-28a)
Célula Reproductora: Escherichia coli BL21
MTG: Transformación
MIC: PCR, cultivo bacteriano, purificación, sedimentación, cristalización, difracción con rayos X,  método SAD y MAD (dispersión anómala múltiple de la longitud de onda)

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3818044/pdf/f-69-01246.pdf

ADN Recombinante Natural

Las primeras vacunas efectivas contra el streptococcus neumoniae es una de las intervenciones clínicas generaron una presión de selección que condujo a la evolución de mutantes y cepas de escape de vacunas que eran altamente resistentes a los antibióticos. La notable capacidad de S. pneumoniae para adquirir resistencia a los medicamentos y evadir la presión de la vacuna se debe a su plasticidad genética mediada por recombinación. S.pneumoniae es competente para la transformación genética natural , una propiedad que permite al neumococo adquirir nuevos rasgos al absorber el ADN desnudo del entorno e incorporarlo en su genoma mediante recombinación homóloga. 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25445643

Técnica de Microrray

Tema: Desarrollo de un nuevo ensayo basado en microarrays de resecuenciación de patógenos para la detección de virus del tracto respiratorio de amplio espectro en pacientes con NAC

Objetivo: Desarrollar y optimizar una nueva RPM (RPM-IVDC1) que consistía en mosaicos de detector de 224 pb correspondientes a 9 subtipos de influenza A, 11 rinovirus, 28 enterovirus y otros 38 virus respiratorios para proporcionar sensibilidades de detección individuales y simultáneas que van desde 15 a 750 copias genómicas para 16 patógenos respiratorios comunes.

Muestra: Aspirados nasofaríngeos

Tipo de ácido nucleico extraído: ARN total

Amplificación: a partir del genoma completo se extrae el ADN

Purificación: Los productos purificados se ligaron al vector pGEM-T (Promega, Madison, WI) y los plásmidos recombinantes se transformaron en E. coli.

El plásmido recombinante de TIM se linealizó con Spe I ytranscrito in vitro a partir del promotor T7 usando el sistema de producción de ARN a gran escala Ribo-MAX ™ T7 (Promega, Madison, WI).

Genes a amplificar: RPM-IVDC1

Hibridación: 49 ° C durante 16 h.

Numero de ciclos: GeXP 

http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0075704